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實時熒光定量PCR（qPCR）三個主要階段介紹
日期：2025-05-10 02:18
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摘要：
實時熒光定量PCR（qPCR）的基本原理包括三個主要階段，這些階段反映了PCR擴(kuò)增過程中的熒光信號變化：
1、基線期：在PCR反應(yīng)開始時，熒光信號幾乎不變，主要是因為背景熒光的存在掩蓋了PCR產(chǎn)物的熒光信號。這一階段的熒光信號變化不大，接近一條直線，用于設(shè)置基線。
2、指數(shù)期：隨著PCR循環(huán)的進(jìn)行，目標(biāo)DNA序列被指數(shù)級擴(kuò)增，熒光信號隨之增加。這一階段熒光信號呈指數(shù)增長，PCR產(chǎn)物量與起始模板量呈線性關(guān)系，是進(jìn)行定量分析的理想階段。
3、平臺期：當(dāng)PCR反應(yīng)接近完成時，由于DNA聚合酶活性下降、底物耗盡或抑制...
實時熒光定量PCR（qPCR）的基本原理包括三個主要階段，這些階段反映了PCR擴(kuò)增過程中的熒光信號變化：
1、基線期：在PCR反應(yīng)開始時，熒光信號幾乎不變，主要是因為背景熒光的存在掩蓋了PCR產(chǎn)物的熒光信號。這一階段的熒光信號變化不大，接近一條直線，用于設(shè)置基線。
2、指數(shù)期：隨著PCR循環(huán)的進(jìn)行，目標(biāo)DNA序列被指數(shù)級擴(kuò)增，熒光信號隨之增加。這一階段熒光信號呈指數(shù)增長，PCR產(chǎn)物量與起始模板量呈線性關(guān)系，是進(jìn)行定量分析的理想階段。
3、平臺期：當(dāng)PCR反應(yīng)接近完成時，由于DNA聚合酶活性下降、底物耗盡或抑制物積累，擴(kuò)增效率降低，熒光信號的增加趨于平緩，zui終停止。這一階段熒光信號不再顯著增加，PCR產(chǎn)物達(dá)到飽和狀態(tài)。
在指數(shù)期，通過設(shè)定熒光閾值（閾值循環(huán)數(shù)，Ct值），可以準(zhǔn)確地對樣品中的初始模板量進(jìn)行定量分析。Ct值越小，說明初始模板量越大。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以將Ct值轉(zhuǎn)換為模板的起始拷貝數(shù)，實現(xiàn)對目標(biāo)序列的定量檢測。