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PCR反應(yīng)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增原因及對(duì)策
日期：2025-05-11 17:43
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摘要：PCR反應(yīng)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增原因及對(duì)策
PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致，或大或小，或者同時(shí)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶與非特異性擴(kuò)增帶。
1、 引物與靶序列不完全互補(bǔ)或引物聚合形成二聚體。
2、 Mg2+離子濃度過高。
3、 退火溫度過低。
4、 PCR循環(huán)次數(shù) 過多有關(guān)。
5、 酶的質(zhì)和量，往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn)，酶量過多有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。
其對(duì)策有：必要時(shí)重新設(shè)計(jì)引 物。減低酶量或調(diào)換另一來源的酶。降低引物量，適當(dāng)增加模板量，減少循環(huán)次 數(shù)。適當(dāng)提高退火溫度或采用二溫度點(diǎn)法（93℃變性，65℃左右退火與延伸）。