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PCR引物設(shè)計的一般原則是什么？
日期：2025-05-11 12:27
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摘要：
PCR引物設(shè)計的一般原則是什么？
1、引物長度：15-30bp,一般為20bp左右。
2、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。上下游引物的GC含量不能相差太大。A/T/C/G*好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
3、引物結(jié)構(gòu)：避免引物3’端出現(xiàn)互補序列及二級結(jié)構(gòu)，3’端的堿基特別是*末及倒數(shù)第2個堿基，應(yīng)嚴格要求配對。
4、引物中酶切位點一般加在5’端，合適的酶切位點便于后續(xù)實驗中的酶切分析或分子克隆。
5、引物濃度：每條引物濃度0....
PCR引物設(shè)計的一般原則是什么？
1、引物長度：15-30bp,一般為20bp左右。
2、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。上下游引物的GC含量不能相差太大。A/T/C/G*好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
3、引物結(jié)構(gòu)：避免引物3’端出現(xiàn)互補序列及二級結(jié)構(gòu)，3’端的堿基特別是*末及倒數(shù)第2個堿基，應(yīng)嚴格要求配對。
4、引物中酶切位點一般加在5’端，合適的酶切位點便于后續(xù)實驗中的酶切分析或分子克隆。
5、引物濃度：每條引物濃度0.1-1umol或10-100pmol，以*低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物間二聚體的形成機會。