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PCR反應擴增產物出現多條帶分析

日期:2025-05-10 11:24
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摘要: 擴增產物出現多條帶 (1)引物用量偏大,引物的特異性不高。應調換引物或降低引物的使用量。 (2)循環(huán)的次數過多。適當增加模板的量,減少循環(huán)次數。 (3)酶的用量偏高或酶的質量不好,應降低酶量或調換另一來源的酶。 (4)退火溫度偏低,退火及延伸時間偏長。應提高退火溫度,減少變性與延伸時間,也可采用二種溫度的PCR擴增。 (5)樣品處理不當。 (6)Mg2+濃度偏高,因適當調整Mg2+使用濃度。 (7)若為PCR試劑盒,也可能時試劑盒本身質量有問題。

擴增產物出現多條帶

1)引物用量偏大,引物的特異性不高。應調換引物或降低引物的使用量。

2)循環(huán)的次數過多。適當增加模板的量,減少循環(huán)次數。

3)酶的用量偏高或酶的質量不好,應降低酶量或調換另一來源的酶。

4)退火溫度偏低,退火及延伸時間偏長。應提高退火溫度,減少變性與延伸時間,也可采用二種溫度的PCR擴增。

5)樣品處理不當。

6)Mg2+濃度偏高,因適當調整Mg2+使用濃度。

7)若為PCR試劑盒,也可能時試劑盒本身質量有問題。

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